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常见问题解答

多肽如何纯化?

多肽纯化技术分为:反相分离技术、分子筛选技术、离子交换分离技术。对于大多数多肽来讲,仅仅一部纯化或者一种技术应用是不够的,通常会将反相、离子交换和分子筛选这三种技术综合起来进行多步纯化,最终达到高的分辨率。

肽的纯度能达到多少?

我公司可以提供不同的纯度级别供客户选择,从粗品到>99.9%纯度。根据客户需要我们可以提供纯度>99.9%的超纯多肽。

什么是净重?什么是肽含量?

肽冻干后一般呈现为蓬松的绒毛状,由于肽本身的特性决定了其中可能仍然含有痕量的水分、吸附的溶剂及盐分等。这不代表肽的纯度不够,仅仅是影响肽的实际含量,使其降低了10%~30%。肽的净重是指肽的实际重量减去水分和质子化离子后的重量。为保证肽的浓度,需要从粗品肽中把非肽物质去除。

提供哪些检测报告?

一般情况下,多肽产品附带有原始的分析数据和合成报告单,上面包含有多肽的序列、分子量、纯度、重量、编号等重要信息。

多肽试剂是如何运输的?

所有冻干的多肽一般盛放在2 ml或10ml的专用容器中密封打包进行运输,在运输包装中还会放置冰袋以保证多肽的稳定性。

如何解释MALDI(MS)中的P+Na 和P+K峰?

经常会在MALDI中看到Na峰和K峰,钠和钾来源于溶剂水。即便是蒸馏水和去离子水也会含有痕量的钠离子和钾离子,无法完全除去。它们在进行质谱分析时也会离子化并与肽的自由羧基结合。因为没有纯化水的系统将水中的钠离子和钾离子除去,所以有时候在MALDI MS图谱中出现钠峰和钾峰也是再所难免的。

多肽试剂使用须知

当准备使用多肽时,请按照如下步骤进行,以保持多肽的品质。

1、在打开瓶子称取一部分多肽之前,先预热使其温度达到室温,建议预热时间为1小时;

 2、在清洁、干燥的环境中迅速称取所需要的量;

3、将剩余的多肽保存在-20℃以下的冷冻室中,加干燥剂装入密闭容器保存。

多肽如何贮存?

正常情况下的多肽都是冻干粉包装。多肽是亲水的,吸收水份会降低肽的稳定性,减少多肽含量。请注意以下内容:第一、用干燥剂,保存在干燥环境中;第二、放入冷冻室-20℃保存,以保持最大稳定性;第三、避免使用没有自动化霜功能的冷冻室,湿度和温度的变化会影响多肽的稳定性;第四、运输中的外界温度不会影响多肽的有效期和质量。

如何知道多肽的纯度?

多肽的纯度标明在产品的C.O.A报告中,参考色谱图。

多肽溶解不完全该怎么办?

通常情况下,多肽首次须溶解于蒸馏水,更适合消毒水。如果溶解不完全或者不溶解,请尝试以下方法:声波降解有助于溶解多肽;少量醋酸稀释溶液(10%浓度)有助于一般多肽的溶解;氨水溶液有助于酸性多肽的溶解。我们还推荐将多肽溶解于高浓度,然后用水或缓冲液将其稀释到正常的工作浓度,因为盐会导致聚合。(所以必须在多肽完全溶解后加入缓冲液。)

如何溶解多肽?

多肽产品的C.O.A报告上记载溶解性,开始溶解前请仔细阅读使用说明。由于多肽的种类不同,溶解性可能各不相同。最普遍的溶解方法是用1ml蒸馏水溶解1mg肽。

如何下单?

我们需要您提供样品的序列,纯度,质量以及付款方式。如果您有货物批号信息,您可以通过邮件或者传真的方式将批号的序列发送给我们。如果您愿意,您可以咨询订货支持。

多肽纯度的测定

多肽的纯度是通过利用HPLC测定目标肽中肽键在214nm的紫外吸收进行测定,水和残留的盐类并不能通过UV检测器进行测定。检测结果还存在其他一些杂质,包括残缺序列肽(比目的肽少一个或更多氨基酸残基的短肽)、截序列(因防止残缺序列肽的产生封端产生的多肽)、不完全的脱保护肽(合成或者最终切割过程中产生的多肽)。

什么是净肽含量?

理解净肽含量和全肽含量的不同很重要,净肽含量是相对于非肽类物质、大部分的平衡离子以及水分而言的肽的百分比。净肽含量可以通过氨基酸分析进行测定,如果您需要这方面的服务请向我们提供应用请求。通常亲水性多肽即便在严格的冻干条件下仍能吸收小分子水分。净肽含量会随着一次次的纯化和冻干步骤发生变化。


多肽如何合成?

与天然蛋白的合成不同,多肽的合成是从C 端到N 端。我们所采用的多肽合成技术主要根据Fmoc 和t-Boc化学法保护α-氨基以实现多肽合成。脱保护试剂(哌啶脱除Fmoc;TFA脱出Boc)解除α-氨基的保护基团以保证序列中下一个氨基酸的耦合。,这个暴露的氨基会与接下来活化的氨基酸形成肽键。当合成完成时,多肽会从树脂上切下来并脱去保护。此时多肽可以沉淀、清洗并最终冷冻干燥得到所要的产品。


固相多肽合成切割方法

固相多肽合成完成之后,必须选择合适的切割试剂将多肽从树脂上切割下来,然后经过冰乙醚沉淀,离心收集沉淀,经过HPLC分离纯化,冷冻干燥得到最后产品。由于选择的树脂不同,氨基酸序列不同,在切割时候,选择的切割方法也不完全相同,一般都是选择酸性条件下切割的条件,对于Wang,Rink-Amide,2-Cl脂,一般采用TFA切割,切割过程中加入,乙二硫醇,苯甲硫醚,水,三异丙基硅烷,苯酚等。这些添加试剂主要作为碳正离子俘获试剂使用,目的是俘获切割反应过程中生成的碳正离子,减少这些碳正离子对部分氨基酸侧链的进攻导致的副反应。切割试剂用量一般10-15ml/g树脂。常用的切割配比: TFA/TIS/EDT/H2O(94/1/2.5/2.5),反应一般是在室温条件下2h-4h。

多肽合成中树脂的用量

拿到客户的订单,我们会根据客户的需求(重量、纯度、盐成分)结合序列的难易度,预估一个生产总收率。通过收率可以计算出合成规模,用合成规模除以树脂的取代度,就可以得到需要树脂的量了。

关于多肽吸潮的问题

多肽在溶解和储存时,应遵循下列要点: 多肽长期保存应放置在-15℃以下。多肽容易吸潮,应先把装有多肽的瓶放在玻璃器中,至于室温下平衡温度,然后才能打开瓶称量多肽,多肽吸收水分后将影响稳定性使多肽含量减少。从瓶中称出所需量的多肽后,应立刻将瓶盖拧紧。

多肽应溶解在适当的溶液中:酸性多肽应溶解在碱性溶液中,碱性多肽应溶解在酸性溶液中。必要时可用超声波帮助溶解。多肽含有Trp,Met,Cys应该特别注意免氧化.应该用无氧的水或还原剂.*储存时,多肽溶液应该分装后置于-15℃以下,多数含有Trp,Met,Cys的多肽半衰期较短,不应长期保存。

特殊多肽合成中存在的问题

由于每一种多肽有它特殊的特征并且不是所有的结果都被预期到。如果我们在合成中出现一些问题同时不能及时发货,我们会及时与您进行沟通。